| Abstract | CILJ ISTRAŽIVANJA
Cilj istraživanja je razvoj metode za analizu onečišćenja entakapona sintetiziranih Pliva Hrvatska d.o.o upotrebom kromatografije superkritičnih fluida, te usporedba s postojećom internom HPLC metodom s naglaskom na njezine prednosti.
Osim razvoja i validacije SFC metode, onečišćenja entakapona će se karakterizirati tehnikom masene spektrometrije (LC-MS). Obraditi će se i literaturno poznate kromatografske metode razvijene i korištene za analitičko ispitivanje entakapona u farmaceutskim formulacijama.
MATERIJAL/METODE
Istraživanja provedena u okviru ovog specijalističkog rada obuhvaćaju pregled svih dostupnih publikacija koristeći dostupne bibliografske baze podataka i servise (Medline/PubMed, ScienceDirect, EMBASE i drugih), uz primjenu ključnih riječi poput: entacapone, quality control, UHPLC, HPLC, SFC i sl.
Napravljena je detaljna studija razvijene interne UHPLC metode za stabilitetna ispitivanja aktivne farmaceutske supstancije entakapon, te prednosti korištenja iste naspram postojeće HPLC metode također razvijene u odjelu Istraživanja i razvoja TAPI R&D Pliva Hrvatska d.o.o.
Korišten je Waters UPC2 sistem s PDA detektorom i gradijentnom pumpom. Optimalna kromatografska kolona je Waters UPC2BEH C18, dimenzija 100 mm x 3.0 mm i promjera čestica 1,7 μm. Za evaluaciju podataka korišteno je Waters Empower 2 CDS upravljačko sučelje. Detekcija onečišćenja je izvršena tehnikom masene spektroskopije, uz korištenje Agilent 6490 LC-MS/MS sistema spregnutog s Agilent 1290 UHPLC te Agilent MassHunter 2003-2007 Data Acquisition for Triple Qual B.01.04 (B84) upravljačko sučelje.
REZULTATI
Gradijentna metoda superkritične fluide kromatografije odjeljuje entakapon i dvanaest njegovih onečišćenja koristeći kromatografsku kolonu Waters Acquity UPC2 BEH. Valna duljina detekcije je 210 nm, protok pokretne faze je 3.0 mL/min. Razlučivanje između pikova entakapona i onečišćenja je veće od 1.5. Metoda je dokazano selektivna, linearna, precizna, točna, robusna, a određene su granice detekcije i kvantifikacije. Granica detekcije je potvrđena za sve komponente i iznosi 0.01%, relativno u odnosu na koncentraciju ispitivane otopine uzorka entakapona od 1.0 mg/mL.
ZAKLJUČAK
Ukazana je prednost razvoja metode za tekućinsku kromatografiju ultra visoke učinkovitosti nad metodama za tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti na primjeru entakapona. Razvijena SFC metoda ima prednost nad svim literaturno poznatim zbog separacije svih sastavnica u prihvatljivom vremenu trajanja analize od 18 minuta. |
| Abstract (english) | OBJECTIVES
Aim of this study is development of method for determination of imputiries in entacapone using supercritical fluid chromatography and comparisment with existing In house HPLC method to show benefits of using SFC. All sintetised impurities will bi caracterizied with LC-MS/MS tehnique
MATERIAL AND METHODS
The research conducted in this specialist thesis includes the overview of relevant publications available through public bibliographic databases and services (Medline/PubMed, ScienceDirect, EMBASE .) obtained by searching the following keywords: entacapone, quality control, UHPLC, HPLC, SFC etc.
In this study was used Waters UPC2 system with PDA detector and gradient pump. Optimal chromatography column is Waters UPC2BEH C18, 100 mm x 3.0 mm,1,7 μm. For data processing is used Waters Empower 2 CDS. Detection of impurites was done using mass spectrometry by using Agilent 6490 LC-MS/MS system cupled with Agilent 1290 UHPLC and for data processing Agilent MassHunter 2003-2007 Data Acquisition for Triple Qual B.01.04 (B84)
RESULTS
Gradient supercritical fluid chromatography method separates entacapone and twelve impurities using Waters Acquity UPC2 BEH column. Detection wavelength is 210 nm, flow of mobile faze is 3.0 mL/min. Resolution between entacapone and impurities is not less than 1.5. Method is validated in all parameters (selectivity, linearity, accuracy, precision, robustness). Detection limit is determed at 0.01% of nominal concentration of sample (1.0 mg/ml)
CONCLUSION
An advantage of supercritical fluid chromatography has been pointend out from high performance liqvid chromatography on example of Entakapone. Developed SFC method has advantage over all literatury known methods since it seperates largest nummer of impurities in only 18 minutes. |
