Dodjela vrijednosti predloženom 2. međunarodnom standardu Svjetske zdravstvene organizacije za faktor zgrušavanja V u plazmi

master's thesis

• Title (english): Value assignment of the prposed WHO 2nd IS Factor V plasma
• Author: Mateja Šako
• Mentor: Renata Zadro (mentor)
• Committee member: Renata Zadro (predsjednik povjerenstva)
• Committee member: Lidija Bach-Rojecky (član povjerenstva)
• Committee member: Andrea Hulina (član povjerenstva)
• Granter: University of Zagreb; Faculty of Pharmacy and Biochemistry; (Department of medical biochemistry and haematology); Zagreb
• Defense date and country: 2021-08-27, Croatia
• Scientific / art field, discipline and subdiscipline: BIOMEDICINE AND HEALTHCARE; Pharmacy; Medical Biochemistry

Abstract

Međunarodni standardi za koagulacijske faktore pojavili su se uspostavom prvog međunarodnog standarda za faktor VIII 1970. godine od strane Svjetske zdravstvene organizacije, kao odgovor na potrebu za preciznom i usklađenom procjenom potentnosti novih terapeutskih koncentrata i od tada se smatraju najvišim stupnjem standardizacije. Svrha referentnih standarada je olakšati standardiziranu karakterizaciju bioloških uzoraka bez obzira na vrstu mjerenja ili metodu koja se koristi. Većini standarada za koagulacijske faktore dodijeljene su vrijednosti u internacionalnim jedinicama (engl. International unit - IU), gdje je 1 IU definirana kao količina analita u 1 mL svježe normalne plazme u pool-u . Vrijednost se IS-u dodjeljuje u velikoj kolaborativnoj studiji u kojoj sudjeluje minimalno 20 različitih ekspertnih laboratorija svih kategorija (akademski, komercijalni i klinički) i koja je pažljivo osmišljena na način da predstavi sve trenutne metodologije kako bi demonstrirala da su dodijeljene vrijednosti primjenjive u svim okolnostima. Laboratoriji koji sudjeluju u ovakvoj studiji dužni su provesti usporedbu pripravka, koji im je, zajedno s detaljnim uputama, osigurao organizator studije, u odnosu na lokalno pripravljen pool svježe normalne plazme.
Svjetska zdravstvena organizacija (SZO) provela je 2018. godine kolaborativnu studiju čiji je cilj bio dodjela vrijednosti zamjenskom internacionalnom standardu (IS) za faktor V u kojoj je sudjelovalo 30 laboratorija iz 14 zemalja, a među njima i Klinički zavod za laboratorijsku dijagnostiku Kliničkog bolničkog centra Zagreb. Razlog provođenja studije bilo je smanjenje preostale zalihe IS za FV u plazmi, koje će biti u potpunosti potrošene unutar godine dana. Imajući na umu definiciju IS-a kao neovisnog o primijenjenoj metodi uspoređeni su pripravak kandidat za 2. IS za FV u plazmi s normalnom plazmom u pool-u i s 1. IS za FV u plazmi koristeći protrombinsko vrijeme (PV), a potom je to isto učinjeno koristeći aktivirano parcijalno tromboplastinsko vrijeme (APTV) kao metodu mjerenja aktivnosti FV. Primjenom obje metode za testiranje zadanog pripravka ispitana je neovisnost određivanja potentnosti IS-a o primijenjenoj metodi, a ujedno i prikladnost primjene APTV-a za određivanje aktivnosti FV u plazmi. Rezultati testiranja obrađeni su od strane SZO. Relativne potentnosti testiranih uzoraka izračunate su uporabom paralalne analize s logaritamskom transformacijom vremena zgrušavanja uporabom minimalno 3 razrjeđenja uzorka na linearnom dijelu baždarnog pravca, a izračuni su izvedeni uporabom programske podrške CombiStats. Za svaki laboratorij generirana je geometrijska sredina logaritamski transformiranih srednjih vrijednosti testiranja, te su one uspoređene dvosmjernim t-testom.
Ovom studijom potvrđen je i omogućen prijenos IU s 1. IS SZO za FV u plazmi na 2. IS SZO za FV u plazmi, s dodijeljenom vrijednošću od 0,72 IU/mL. Studijom su prikazane sve metodologije koje su se u tom trenutku koristile za određivanje aktivnosti FV u plazmi što potvrđuje neovisnost određivanja potentnosti IS-a o korištenoj metodi i mogućnost primjene modificirane metode APTV-a za određivanje aktivnosti FV u plazmi.

Abstract (english)

International standards (IS) for coagulation factors have only appeared relatively recently in the history of biological standards, with the establishment of the first IS for factor VIII concentrate by the World Health Organization (WHO) in 1970., in response to the need for accurate and harmonized potency estimation for the new therapeutic concentrates and because it is the highest form of standardization. WHO biological reference standards comprise materials of complex composition that require biological or immunological assay for appropriate characterization. Most standards for plasma coagulation factors and inhibitors have assigned values in International Units (IU) where 1 IU is defined as the amount of analyte in 1mL of fresh, pooled, normal plasma. IU value is assigned through colaborative study with participation of at least 20 expert laboratories in all categories (academy, comercial, clinical) and is designed to demonstrate all curently used metodologies. Participating laboratories are asked to assay given preparations relative to local normal plasma pool, as given in instructions. A collaborative study involving 30 laboratories from 14 countries has been undertaken to assign the value to the proposed WHO 2nd International Standard Factor V in plasma. The reason for the study was low remaining stocks of the WHO 1st IS for Factor V in plasma that will be exhausted whitin a year. IS value is methodology independent and WHO 2nd IS for Factor V in plasma is tested relative to WHO 1st IS for Factor V in plasma using PT and APTT metodologies. By using both metodologies independency of metodologies is tested. Relative potencies of test samples were calculated using parallel line analysis with a log transformation of clotting time, using a minimum of three sample dilutions on the linear section of the dose-response curve and calculations were performed using the software CombiStats. Relative laboratories potency estimates were generated as geometric mean and comparison between test data were made by two-tailed-t-test. This study confirmed methodology independency for IS potency estimation.

• Keywords: faktor zgrušavanja V; međunarodni standard
• Keywords (english): factor V; international standard
• Language: croatian
• URN:NBN: urn:nbn:hr:163:753057
• Study programme: Title: Medical biochemistry; Study programme type: university; Study level: integrated undergraduate and graduate; Academic / professional title: magistar/magistra medicinske biokemije i laboratorijske medicine (magistar/magistra medicinske biokemije i laboratorijske medicine)
• Type of resource: Text
• File origin: Born digital
• Access conditions: Open access
• Created on: 2022-02-02 10:03:22