| Abstract | Rak dojke predstavlja značajan javnozdravstveni problem zbog svojeg utjecaja na živote brojnih žena širom svijeta. U posljednjih
nekoliko godina, značajan napredak postignut je u liječenju raka dojke pozitivnog na hormonski receptor i negativnog na HER2 s
PIK3CA mutacijom korištenjem kombinacije alpelisiba s drugim lijekovima kao što su fulvestrant ili anastrozol. Alpelisib, inhibitor
PI3K-a, pokazuje velik potencijal u uspješnom liječenju ove vrste raka dojke, ali optimalni ishodi liječenja zahtijevaju učinkovito
praćenje terapije. U svrhu ovog rada razvijena je i validirana HPLC-DAD-FLD metoda za analizu alpelisiba u ljudskoj plazmi. Uzorci plazme pripremljeni su jednostavnom metodom taloženja proteina pomoću organskog otapala, što je osiguralo čistu analitnu matricu pogodnu za daljnju analizu. Korištena je kolona Phenomenex Gemini C18, dimenzija 150 × 4,6 mm i veličine čestica stacionarne faze 5 µm pri konstantnoj temperaturi od 25 °C. U razvijenoj metodi korištena je gradijentna eluacija mobilnom fazom koja se sastoji od 0,1 % mravlje kiseline u vodi i 0,1 % mravlje kiseline u metanolu. Brzina protoka iznosila je 1 mL/min. Korišteni su UV-Vis detektor i fluorescencijski detektor. Validacija metode provedena je ispitivanjem parametara linearnosti, točnosti, preciznosti i utjecaja matrice. Metoda je pokazala zadovoljavajuću linearnost unutar raspona koncentracija od 300 do 3000 ng/mL (r za DAD iznosi 0,99755, a za FLD 0,99664), visoku točnost (sve dobivene koncentracije čine od -1,8 do 11,3 % stvarne vrijednosti) i preciznost (RSD vrijednosti iznose od 1,1 do 4,3 %), te minimalan utjecaj matriksa (Meff se kreće od 95,8 do 106,1 %), čime je potvrđena njezina pouzdanost za analizu alpelisiba u kliničkim uzorcima. Konačno, razvijena i validirana metoda primijenjena je za analizu alpelisiba u plazmi tri pacijentice od kojih su rezultati za dvije pacijentice unutar validiranog raspona metode, a kod treće pacijentice alpelisib nije bilo moguće detektirati. Postoji mogućnost da pacijentica nije bila adherentna ili da je koncentracija u plazmi bila preniska da bi se ovom metodom mogla detektirati. Također je moguće da postoje interindividualne varijabilnosti koje utječu na koncentraciju alpelisiba u plazmi. Razvijena HPLC-DAD-FLD metoda za analizu alpelisiba u ljudskoj plazmi predstavlja napredak u mogućnostima praćenja terapije kod pacijentica s rakom dojke. Ova metoda može se koristiti za daljnja ispitivanja farmakokinetike alpelisiba, kao i za personalizaciju liječenja na temelju interindividualnih varijabilnosti među pacijenticama. Time se može postići bolja prilagodba terapije individualnim potrebama pacijentica, što će u konačnici rezultirati poboljšanjem ishoda liječenja i kvalitete života pacijentica oboljelih od raka dojke. |
| Abstract (english) | Breast cancer represents a significant public health problem due to its impact on the lives of numerous women worldwide. In recent years, significant progress has been made in the treatment of hormone receptor-positive and HER2-negative breast cancer with PIK3CA mutation using a combination of alpelisib with other drugs such as fulvestrant or anastrozole. Alpelisib, a PI3K inhibitor, shows great potential in successfully treating this type of breast cancer, but optimal treatment outcomes require effective therapymonitoring. For the purpose of this study, an HPLC-DAD-FLD method was developed and validated for the analysis of alpelisib in human plasma. Plasma samples were prepared using a simple protein precipitation method with an organic solvent, ensuring a clean analytical matrix suitable for further analysis. A Phenomenex Gemini C18 column, dimensions 150 × 4.6 mm and particle size 5 µm, was used at a constant temperature of 25 °C. The developed method employed gradient elution with a mobile phase consisting of 0.1% formic acid in water and 0.1% formic acid in methanol. The flow rate was 1 mL/min. Both UV-Vis and fluorescence detectors were used. Method validation was carried out by examining parameters of linearity, accuracy, precision, and matrix effect. The method demonstrated satisfactory linearity within the concentration range of 300 to 3000 ng/mL (with an r value of 0.99755 for DAD
and 0.99664 for FLD), high accuracy (all obtained concentrations range from -1.8 to 11.3% of the true value) and precision (RSD values range from 1.1 to 4.3%), and minimal matrix effect (Meff ranges from 95.8 to 106.1%), confirming its reliability for the analysis of alpelisib in clinical samples.Finally, the developed and validated method was applied to analyze alpelisib in the plasma of three patients. The results for two patients were within the validated range of the method, while alpelisib could not be detected in the third patient's plasma. It is possible that the patient was not adherent to the therapy or that the plasma concentration was too low to be detected by this method. Additionally, inter-individual variability may affect the concentration of alpelisib in plasma.The developed HPLC-DAD-FLD method for analyzing alpelisib in human plasma represents an advancement in the capabilities of therapy monitoring for breast cancer patients. This method can be used for further pharmacokinetic studies of alpelisib and for the personalization of treatment based on inter-individual variability among patients. This approach can lead to better adjustment of therapy to the individual needs of patients, ultimately resulting in improved treatment outcomes and quality of life for breast cancer patients. |
