Uloga genskog polimorfizma tiopurinmetiltransferaze u optimizaciji terapije azatioprinom u bolesnika s upalnom bolešću crijeva

završni specijalistički

• Autor: Paula Bakalović
• Mentor: Nada Božina (mentor)
• Član povjerenstva: Karmela Barišić (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Nada Božina (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Vesna Bačić Vrca (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Farmaceutsko-biokemijski fakultet; Zagreb
• Datum i država obrane: 2021-05-28, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO; Farmacija; Farmacija

Sažetak

Cilj istraživanja
Važan čimbenik rizika za nastanak nuspojava prilikom liječenja azatioprinom predstavlja
polimorfizam gena koji kodira tiopurinmetiltransferazu (TPMT), metabolički enzim
odgovoran za ravnotežu između terapijskog i citotoksičnog učinka tiopurina.
Cilj ovog rada je pregledno prikazati stanje u provođenju genotipizacije TPMT u hrvatskoj
populaciji, odnosno odrediti učestalost varijantnih alela (TPMT*2,*3A,*3C) odgovornih za
smanjenu aktivnost TPMT-a. Također, cilj je prikazati raspodjelu polimorfizama gena TPMT
po dobi i spolu te raspodjelu zahtjeva za analizom TPMT prema razini zdravstvene zaštite
(primarna, sekundarna, tercijarna).
Materijal i metode
Istraživanje je provedeno u Odjelu za farmakogenomiku i individualizaciju terapije u
Kliničkom zavodu za laboratorijsku dijagnostiku Kliničkog bolničkog centra Zagreb.
Analizirani su rezultati 494 prispjela zahtjeva za rutinsko određivanje genotipa TPMT u
bolesnika koji boluju od upalnih bolesti crijeva, u 2019. godini.
Podaci dobiveni iz genotipizacije TPMT analizirani su retrospektivno. Određivanje genotipa
provedeno je iz uzorka krvi od 3 ml u epruveti s Na-EDTA.
Genotipizacija polimorfizama TPMT*2, TPMT*3B i TPMT*3C provedena je TaqMan®
metodom lančane reakcije polimerazom u stvarnom vremenu za otkrivanje i analizu
polimorfizama jednog nukleotida. Određivanje polimorfizama izvedeno je na uređaju za PCR
u stvarnom vremenu analizom alelne diskriminacije.
Rezultati
Divlji genotip pronađen je u 93,9 % ispitivanih uzoraka, a udio varijantnih genotipova iznosio
je 6,07 %. Najčešće zabilježeni varijantni genotip bio je TPMT*1/*3A (5,9 %), a u jednog
bolesnika nađen je varijantni genotip TPMT*1/*3C.
Najveći broj bolesnika upućen je na testiranje od strane izabranog doktora primarne
zdravstvene zaštite, a prema preporuci specijaliste gastroenterologa. Slijede po učestalosti
zahtjevi iz tercijarnih ustanova - kliničkih bolnica i kliničkih bolničkih centara, te zahtjevi iz
općih bolnica odnosno ustanova sekundarne razine zdravstvene zaštite.
Zaključak
Rezultati ovog istraživanja podudaraju se s rezultatima ranije provedenih istraživanja u
hrvatskoj populaciji. Učestalost varijantnih genotipova slična je onoj u drugim europskim
populacijama.
Genotipizacija TPMT je koristan alat za probir bolesnika oboljelih od upalne bolesti crijeva
koji imaju povećan rizik od mijelotoksičnosti, prilikom primjene standardnih doza
azatioprina. Kod osoba koji su heterozigoti ili homozigoti za mutirani alel zbog čega imaju
reduciranu enzimsku aktivnost TPMT-a, potrebno je prilagoditi početnu dozu kao i daljnju
titraciju doze.

Sažetak (engleski)

Objectives
An important risk factor for the occurrence of side effects during azathioprine treatment is the
Genotipizacija TPMT), a metabolic
enzyme responsible for the balance between the therapeutic and cytotoxic effects of
thiopurine.
The aim of this paper is to present the situation in the implementation of TPMT genotyping in
the Croatian population, that is to determine the frequency of variant alleles (TPMT*2, *3A,
*3C) responsible for the reduced TPMT activity. Also, the aim is to present the distribution of
TPMT gene polymorphisms by age and sex and the distribution of requirements for TPMT
analysis according to the level of health care (primary, secondary, tertiary).
Material and Methods
The research was conducted in the Department of Pharmacogenomics and Individualization of
Therapy at the Clinical Institute for Laboratory Diagnostics of the Clinical Hospital Center
Zagreb. The results of 494 received requests for routine TPMT genotyping in patients with
inflammatory bowel disease in 2019 were analyzed.
Data obtained from TPMT genotyping were analyzed retrospectively. Genotyping was
performed from a 3 ml blood sample in a Na-EDTA tube.
Genotyping of TPMT*2, TPMT*3B and TPMT*3C polymorphisms was performed by the
TaqMan® real-time polymerase chain reaction method for detection and analysis of single
nucleotide polymorphisms. Determination of polymorphisms was performed on a real-time
PCR device by allelic discrimination analysis.
Results
The wild genotype was found in 93,9 % of the examined samples, and 6,07 % were
heterozygous and harbored polymorphisms. The most commonly reported variant genotype
was TPMT*1/*3A (5,9 %), and a variant genotype TPMT*1/*3C was found in one patient.
Most patients were referred for testing by a selected primary care physician, as recommended
by a gastroenterologist. This is followed by the frequency of requests from tertiary institutions
- clinical hospitals and clinical hospital centers, and requests from general hospitals and
institutions of the secondary level of health care.
Conclusion
The results of this research coincide with the results of previous research conducted in the
Croatian population. The frequency of variant genotypes is similar to that in other European
populations.
Genotyping TPMT is a useful tool for screening patients with inflammatory bowel disease
who have an increased risk of myelotoxicity, when standard doses of azathioprine are
administered. In individuals who are heterozygous or homozygous for the mutant allele and
therefore have reduced TPMT enzyme activity, the starting dose as well as further dose
titration should be adjusted.

• Ključne riječi: polimorfizam gena; tiopurinmetiltransferaza; TPMT; genotipizacija TPMT; upalna bolest crijeva; azatioprin
• Ključne riječi (engleski): gene polymorphism; thiopurine methyltransferase; TPMT; genotyping TPMT; inflammatory bowel disease; azathioprine
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:163:372992
• Studijski program: Naziv: Klinička farmacija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: poslijediplomski specijalistički; Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a magistar/sveučilišna magistra kliničke farmacije (univ. mag. pharm.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2022-03-17 14:56:17