Razvoj bioanalitičke metode za određivanje pirfenidona primjenom LC-MS tehnike

diplomski rad

• Naslov (engleski): Bioanalytical method development for determination of pirfenidone by LC-MS technique
• Autor: Petra Tremski
• Mentor: Miranda Sertić (mentor)
• Član povjerenstva: Miranda Sertić (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Biljana Nigović (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Sandra Šupraha Goreta (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Farmaceutsko-biokemijski fakultet; (Zavod za analitiku i kontrolu lijekova); Zagreb
• Datum i država obrane: 2016-05-24, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO; Farmacija; Farmacija

Sažetak

Idiopatska plućna fibroza je rijetka, teška i kronična bolest koju karakterizira progresivna fibroza intersticija pluća što dovodi do smanjenja volumena pluća i progresivne plućne insuficijencije. Jedini lijek odobren za liječenje blage do umjerene plućne fibroze u odraslih osoba je pirfenidon. Za praćenje kliničkog učinka pirfenidona i/ili njegovih metabolita u biološkim uzorcima moraju se koristiti pouzdane, osjetljive i specifične metode.
Cilj ovog rada bio je ispitati vrijeme zadržavanja pirfenidona u različitim omjerima mobilne faze voda:acetonitril:mravlja kiselina kako bi analiza pirfenidona u biološkim uzorcima primjenom tekućinske kromatografije visoke djelotvornosti spregnute s masenim spektrometrom trajala što kraće.
Ispitane su dvije kolone, Symmetry C18 i XBridge C18, a kako nije bilo velike razlike u selektivnosti, odabrana je kraća XBridge kolona, koja daje kraće vrijeme analize, na kojoj su ispitane mobilne faze različitog sastava voda:ACN:mravlja kiselina, a odabrana je mobilna faza voda:ACN:HCOON=60:40:01 (v/v/v) jer je vrijeme analize bilo zadovoljavajuće kratko, a simetrija kromatografskih pikova dobra. Protok mobilne faze podešen je na 0.4 mL/min, a optimalna valna duljina DAD detektora podešena je na 225 nm. Ispitan je utjecaj udjela vode u mobilnoj fazi na vrijeme zadržavanja pirfenidona, širinu i visinu kromatografskog pika. Također je proučena fragmentacija molekule pirfenodina na masenom spektrometru. Kako će se metoda primjenjivati za analizu pirfenidona u biološkim uzorcima, ispitana je selektivnost predložene metode pomoću DAD i MS detektora u serumu u koji je dodan pirfenidon ( = 0.1 mg/mL) te je MS očekivano pokazao bolju selektivnost.
Daljnja istraživanja bit će usmjerena na određivanje pirfenidona i njegovih metabolita u biološkim uzorcima jer je za kliničko praćenje pirfenidona, osim praćenja koncentracije samog lijeka, nužno pratiti i koncentraciju metabolita.

Sažetak (engleski)

Idiopathic pulmonary fibrosis is a rare, chronic and serious disease which leads to lung volume diminishment and progressive lung insufficiency due to the fibrosis of the interstitium of the lungs. The only drug approved for treating mild to moderate lung fibrosis in adults is pirfenidone. Specific and sensitive methods must be used in order to monitor the therapeutic effect of the drug and its metabolites in biological samples. The point of this thesis was to evaluate the time of retention of pirfenidone by changing the ratio of the solvents used for the mobile phase. The mobile phase consisted of purified water, acetonitril and formic acid. Different ratios within the mobile phase were used in order to shorten the time needed to perform the high-performance liquid chromatography and mass spectrometer analysis of pirfenidone in biological samples. Two columns, Symmetry C18 and Xbridge C18 were tested prior to the analysis. Even though there was no significant difference in the selectivity of the above mentioned columns, Xbridge C18 was chosen because it was shorter and it gave shorter analysis time. The Xbridge column was used to choose the optimum mobile phase consisting of water, acetonitril and formic acid for the final evaluation. Due to satisfactory time of analysis and symmetrical chromatographic peaks , mobile phase with the following solvent ratios was chosen: water: acetonitril: formic acid = 60:40:1. Mobile phase flow was set to 0,4 ml/min and the wave length of the DAD detector was set to225 nm. The influence of water in the mobile phase on the retention time, as well as the width and height of the peak of pirfenidone was also tested. Furthermore, the fragments of the mass spectre of pirfenidone were evaluated afterwards. Since the newly developed method is expected to be used for the analysis of pirfenidone in biological samples, it was neccessary to evaluate the selectivity of the method by using the DAD detector and mass spectrometer in the analysis of a serume containing 0,1 milligrams of pirfenidone per millimeter. The selectivity of the mass spectrometer was more satisfactory, as expected. Further tests shall be concentrated on determining pirfenidone and its metabolites in biological samples because, in order to monitor the therapeutic effect of pirfenidone, one must also monitor the concentration of its metabolites as well.

• Ključne riječi: idiopatska plućna fibroza; pirfenidon; LC-MS; bioanalitička metoda
• Ključne riječi (engleski): idiopathic pulmonary fibrosis; pirfenidone; LC-MS; bioanalytical method
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:163:247897
• Studijski program: Naziv: Farmacija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: integrirani preddiplomski i diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra farmacije (mag. pharm.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Pristup korisnicima matične ustanove
• Datum i vrijeme pohrane: 2016-12-06 12:21:37